Entecavir
C12H15N5O3·H2O 295,29
6H-Purin-6-on, 2-amino-1,9-dihydro-9-[(1S,3R,4S)-4-hydroxy-3-(hydroxymethyl)-2-methylencyclopentyl]-, Monohydrat;
9-[(1S,3R,4S)-4-Hydroxy-3-(hydroxymethyl)-2-methylencyclopentyl]guaninmonohydrat [209216-23-9]; UNII: 5968Y6H45M.
Wasserfrei 277,28
DEFINITION
Entecavir ist ein Monohydrat und enthält 98 % NLT und 102 % NMT von Entecavir (C12H15N5O3), berechnet auf wasserfreier Basis.
IDENTIFIZIERUNG
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• A. SPEKTROSKOPISCHE IDENTIFIZIERUNGSTESTS<197>, Infrarotspektroskopie: 197A oder 197K (CN 1-Mai-2020)
• B. Die Retentionszeit des Hauptpeaks der Probenlösung entspricht der der Standardlösung, wie sie im Test ermittelt wurde.
TEST
• VERFAHREN
Lösung A: Acetonitril und Wasser (3:97)
Lösung B: Acetonitril
Mobile Phase: Siehe Tabelle 1. [HINWEIS- Die Gradientenelutionszeiten werden auf einem HPLC-System mit einem Verweilvolumen von ca. 1,0 ml ermittelt.]
Tabelle 1 Zeit (Min.) Lösung A (%) Lösung B (%)
0 100 0
8 100 0
50 77 23
75 17 83
90 100 0
100 100 0
Stammlösung zur Systemeignung: 1,0 mg/ml USP Entecavir System Suitability Mixture RS in Methanol
Systemeignungslösung: 0,2 mg/ml USP Entecavir System Suitability Mixture RS in Lösung A aus der Systemeignungsstammlösung
Standard-Stammlösung: 1,0 mg/ml USP Entecavir-Monohydrat RS in Methanol. Nach Bedarf beschallen.
Standardlösung: 0,2 mg/ml USP Entecavir Monohydrat RS in Lösung A aus der Standard-Stammlösung
Probenstammlösung: 1,0 mg/ml Entecavir in Methanol. Nach Bedarf beschallen.
Probenlösung: 0,2 mg/ml Entecavir in Lösung A aus der Probenstammlösung
Chromatographisches System
(Siehe Chromatographie<621>, Systemeignung.)
Modus: LC
Detektor: UV 254 nm
Säule: 4,6 mm × 25 cm; 5-µm Packung L1
Flussrate: 1 ml/min
Injektionsvolumen: 10 µL
Systemtauglichkeit
Beispiele: Systemeignungslösung und Standardlösung
[ HINWEIS- Die relativen Retentionszeiten der Komponenten in der Systemeignungslösung finden Sie in Tabelle 2.]
Eignungsanforderungen
Auflösung: NLT 3,5 zwischen Entecavir 1-Epimer und Entecavir; NLT 2.0 zwischen Entecavir und 8-Hydroxy-Entecavir, System
Eignungslösung
Tailing-Faktor: 0,8-1,5 für Entecavir, Systemeignungslösung
Relative Standardabweichung: NMT 1,5 %, Standardlösung
Analyse
Proben: Standardlösung und Musterlösung
Berechnen Sie den Prozentsatz von Entecavir (C12H15N5O3) in der eingenommenen Entecavir-Portion:
Ergebnis = (ru /rs) × (Cs /Cu) × 100
ru = Spitzenreaktion von Entecavir aus der Probenlösung
rs = Spitzenreaktion von Entecavir aus der Standardlösung
Cs = Konzentration von USP Entecavir Monohydrat RS in der Standardlösung (mg/ml)
Cu = Konzentration von Entecavir in der Probenlösung (mg/ml)
Akzeptanzkriterien: 98 % - 102 % auf wasserfreier Basis
VERUNREINIGUNGEN
• ORGANISCHE VERUNREINIGUNGEN
Lösung A, Lösung B, mobile Phase, Systemeignungs-Stammlösung, Systemeignungslösung, Proben-Stammlösung, Probenlösung und chromatographisches System: Gehen Sie wie im Test beschrieben vor.
Standard-Stammlösung: Verwenden Sie die Standardlösung aus dem Test.
Standardlösung: 0,2 µg/ml USP Entecavir-Monohydrat RS in Lösung A aus der Standard-Stammlösung
Systemtauglichkeit
Beispiele: Systemeignungslösung und Standardlösung
[ HINWEIS- Die relativen Retentionszeiten der Komponenten in der Systemeignungslösung finden Sie in Tabelle 2.]
Eignungsanforderungen
Auflösung: NLT 3,5 zwischen Entecavir 1-Epimer und Entecavir; NLT 2.0 zwischen Entecavir und 8-Hydroxy-Entecavir, Systemeignungslösung
Tailing-Faktor: 0,8-1,5 für Entecavir, Systemeignungslösung
Relative Standardabweichung: NMT 10,0 %, Standardlösung
Analyse
Proben: Musterlösung und Standardlösung
Berechnen Sie den Prozentsatz jeder Verunreinigung in der eingenommenen Entecavir-Portion:
Ergebnis = (ru /rs) × (Cs /Cu) × (1/F) × 100
ru = Spitzenreaktion jeder Verunreinigung aus der Probenlösung
rs = Spitzenreaktion von Entecavir aus der Standardlösung
Cs = Konzentration von USP Entecavir Monohydrat RS in der Standardlösung (mg/ml)
Cu = Konzentration von Entecavir in der Probenlösung (mg/ml)
F = relativer Responsefaktor (siehe Tabelle 2)
Akzeptanzkriterien: Siehe Tabelle 2. Spitzenwerte unter 0,05 % werden nicht berücksichtigt.
Tabelle 2
Name Relative Retentionszeit Relativer Reaktionsfaktor Akzeptanzkriterien, NMT (%)
Furoentecavir a 0,73 1,0 0,1
Entecavir 1-Epimer b 0,93 1,0 0,1
Entecavir 3-Epimer c 0,96 1,0 0,1
Entecavir 1,0 – -
8-Hydroxyentecavir d 1,03 0,67 0,1
Entecavir 4-epimer e 1,08 1,0 0,1
8-Methoxyentecavir f 1,27 0,67 0,1
4-Dimethylsilylentecavir g 1,84 1,0 0,1
Entecavir-verwandte Verbindung A 3.41 – -
Jede nicht spezifizierte Verunreinigung – 1,0 0,1
Gesamtverunreinigungen i – - 0,3
a 9-[(3aS,4S,6S,6aR)-3a,6-Dihydroxyhexahydro-1H-cyclopenta[c]furan-4-yl]guanin.
b 9-[(1R,3R,4S)-4-Hydroxy-3-(hydroxymethyl)-2-methylencyclopentyl]guanin.
c 9-[(1S,3S,4S)-4-Hydroxy-3-(hydroxymethyl)-2-methylencyclopentyl]guanin.
d 8-Hydroxy-9-[(1S,3R,4S)-4-hydroxy-3-(hydroxymethyl)-2-methylencyclopentyl]guanin.
e 9-[(1S,3R,4R)-4-Hydroxy-3-(hydroxymethyl)-2-methylencyclopentyl]guanin.
f 8-Methoxy-9-[(1S,3R,4S)-4-hydroxy-3-(hydroxymethyl)-2-methylencyclopentyl]guanin.
g 9-[(1S,3R,4S)-4-Hydroxydimethylsilyl-3-(hydroxymethyl)-2-methylencyclopentyl]guanin.
h Nur zur Information; quantifiziert im Test für den Grenzwert der mit Entecavir verwandten Verbindung A.
i Beinhaltet die Summe aller Verunreinigungen, die in den Tests zum Grenzwert der Entecavir-bezogenen Verbindung A und organischen Verunreinigungen gefunden wurden.
• GRENZWERT DER ENTECAVIR-VERWANDTEN VERBINDUNG A
Lösung A: 0,1 % (v/v) Trifluoressigsäure in Wasser
Lösung B: 0,1 % (v/v) Trifluoressigsäure in Acetonitril
Mobile Phase: Siehe Tabelle 3. [ HINWEIS- Die Gradientenelutionszeiten werden auf einem HPLC-System mit einem Verweilvolumen von ermittelt
ca. 1,0 ml.]
Tabelle 3
Zeit (Min.) Lösung A (%) Lösung B (%)
0 65 35
8 53 47
8,1 65 35
11 65 35
Standardlösung: 2 µg/ml USP Entecavir Related Compound A RS in Methanol
Probenlösung: 1,0 mg/ml Entecavir in Methanol. Nach Bedarf beschallen.
Chromatographisches System
(Siehe Chromatographie<621>, Systemeignung.)
Modus: LC
Detektor: UV 254 nm
Spalte: 4,6 mm × 5 cm; 5-µm Packung L1
Temperaturen
Autosampler: 4°
Säule: 30°
Flussrate: 2 ml/min
Injektionsvolumen: 10 µL
Systemtauglichkeit
Beispiel: Standardlösung
Eignungsanforderungen
Tailing-Faktor: 0,8-1,5
Relative Standardabweichung: NMT 3,0 %
Analyse
Proben: Standardlösung und Musterlösung
Berechnen Sie den Prozentsatz der mit Entecavir verwandten Verbindung A in der eingenommenen Entecavir-Portion:
Ergebnis = (ru /rs) × (Cs /Cu) × 100
ru = Spitzenreaktion der Entecavir-verwandten Verbindung A aus der Probenlösung
rs = Spitzenreaktion der Entecavir-verwandten Verbindung A aus der Standardlösung
Cs = Konzentration der USP Entecavir-verwandten Verbindung A RS in der Standardlösung (mg/ml)
Cu = Konzentration von Entecavir in der Probenlösung (mg/ml)
Akzeptanzkriterien: NMT 0,1 %
SPEZIFISCHE TESTS
• WASSERBESTIMMUNG<921>, Methode I, Methode Ic: 5,5 %-7,0 %
• OPTISCHE ROTATION<781S>, Verfahren, Spezifische Rotation
Probenlösung: 10 mg/ml Entecavir in einer Mischung aus Dimethylformamid und Methanol (50:50)
Akzeptanzkriterien: +24° bis +30°
ZUSÄTZLICHE ANFORDERUNGEN
• VERPACKUNG UND LAGERUNG: In gut verschlossenen, lichtgeschützten Behältern aufbewahren. Bei Raumtemperatur lagern.
• USP-REFERENZSTANDARDS<11>
USP Entecavir-Monohydrat RS
USP Entecavir-verwandte Verbindung A RS
3-Benzyl-4-Silylentecavir;
9-[(1S,3R,4S)-4-Dimethylphenylsilyl-3-(Benzyloxymethyl)-2-Methylencyclopentyl]guanin.
C27H31N5O2Si 485,65
USP Entecavir System Suitability Mixture RS
Die Mischung enthält Entecavir-Monohydrat und die folgenden Verunreinigungen (andere Verunreinigungen können ebenfalls vorhanden sein):
Entecavir 1-Epimer.
8-Hydroxy-Entecavir.
8-Methoxyentecavir.

Kontakt: Dr. Alvin Huang

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