Lactobionsäure
C12H22O12 (Säureform) 358,3 [96-82-2].
C12H20O11 (-Lacton) 340,3 [5965-65-1].
4-O--Galactopyranosyl-d-gluconsäure.
DEFINITION
Lactobionsäure ist eine Mischung in variablen Anteilen aus 4-O-d-Galactopyranosyl-d-gluconsäure und 4-O-d-Galactopyranosyl-d-glucono-1,5-lacton. Es enthält 98,0 % NLT und 102,0 % NMT, auf wasserfreier Basis.
IDENTIFIZIERUNG
• A. Infrarotabsorption<197K>: [Hinweis-Wenn die erhaltenen Spektren Unterschiede aufweisen, lösen Sie die Testsubstanz und USP Lactobionic Acid RS getrennt in Wasser, trocknen Sie bei 105 und zeichnen Sie neue Spektren mit den Rückständen auf.]
• B. Dünnschichtchromatographie<621>
Standardlösung: 10 mg/ml USP Lactobionsäure RS
Probenlösung: 10 mg/ml Lactobionsäure
Adsorbens: Chromatographische Kieselgelmischung mit einer durchschnittlichen Partikelgröße von 10-15 µm (DC-Platten)
Entwicklungslösungsmittel: Methanol, Ethylacetat, Ammoniumhydroxid und Wasser (2:1:1:1)
Anwendungsvolumen: 5 µL
Sprühreagenz: Geben Sie langsam 10 ml Schwefelsäure zu etwa 40 ml Wasser hinzu. Mischen und abkühlen lassen. Mit Wasser auf 100 ml verdünnen und mischen. Fügen Sie 2,5 g Ammoniummolybdat und 1 g Cersulfat hinzu und schütteln Sie es 15 Minuten lang, um es aufzulösen.
Analyse: Entwickeln Sie die Chromatogramme, bis sich die Lösungsmittelfront etwa drei Viertel der Länge der Platte bewegt hat, und lassen Sie sie trocknen. Besprühen Sie die Platte mit Sprühreagenz und lassen Sie sie trocknen. Wiederholen Sie den Vorgang noch zweimal, erhitzen Sie ihn 15 Minuten lang auf 110 °C und untersuchen Sie ihn.
Akzeptanzkriterien: Der Hauptfleck aus der Probenlösung ähnelt in Position und Farbe dem Hauptfleck aus der Standardlösung.
TEST
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• Vorgehensweise
Probe: NF30 0,350 g Lactobionsäure NF30
Analyse: Lösen Sie die Probe in 50 ml kohlendioxidfreiem Wasser auf, das zuvor auf 30,NF30 erhitzt wurde. Titrieren Sie sofort mit 0,1 NNF30-Natriumhydroxid und bestimmen Sie die beiden Äquivalenzpunkte potentiometrisch. (Siehe Titrimetrie 541.)
Jeder ml 0,1 N Natriumhydroxid, der bis zum ersten Äquivalenzpunkt verbraucht wird, entspricht 35,83 mg C12H22O12 (entspricht der Säureform), und jeder ml 0,1 N Natriumhydroxid, der zwischen dem ersten und zweiten Äquivalenzpunkt verbraucht wird, entspricht 34,03 mg C12H20O11 (entspricht der Lactonform).
Berechnen Sie den prozentualen Gehalt an Lactobionsäure als Summe beider Ergebnisse.NF30
Akzeptanzkriterien: 98,0 % - 102,0 % auf wasserfreier Basis.
VERUNREINIGUNGEN
• Schwermetalle<231>
Thioacetamid-Reagenz: Zu 0,2 ml Thioacetamid TS 1 ml einer Mischung aus 5 ml Wasser, 15 ml 1 M Natriumhydroxid und 20 ml Glycerin hinzufügen. 20 s im Wasserbad erhitzen. [Hinweis-Unmittelbar vor der Verwendung vorbereiten.]
Bleinitrat-Stammlösung: Gemäß den Anweisungen für Spezialreagenzien für Schwermetalle<231> vorbereiten.
Standardlösung: Verdünnen Sie am Tag der Verwendung 2,0 ml der Bleinitrat-Stammlösung (10 ppm Pb) in Wasser auf 30 ml.
Probenlösung: 1 g Lactobionsäure in Wasser auf 30 ml auflösen.
Bereiten Sie das Filtergerät vor, indem Sie den Zylinder einer 50-ml-Spritze ohne Kolben an einen Träger anpassen, der auf der Platte einen Membranfilter mit einer Porengröße von 3 µm und darüber einen Vorfilter enthält.
Übertragen Sie die Probenlösung in den Spritzenzylinder, setzen Sie den Kolben ein und üben Sie dann einen gleichmäßigen Druck aus, bis die gesamte Flüssigkeit gefiltert wurde. Achten Sie beim Öffnen der Halterung und beim Entfernen des Vorfilters darauf, dass der Membranfilter frei von Verunreinigungen bleibt. Ist dies nicht der Fall, ersetzen Sie ihn durch einen anderen Membranfilter und wiederholen Sie den Vorgang unter den gleichen Bedingungen.
Analyse: Zum Vorfiltrat 2 ml Acetatpuffer mit pH 3,5 hinzufügen. Mischen und 1,2 ml Thioacetamid-Reagenz hinzufügen. Sofort mischen, 10 Minuten stehen lassen und erneut wie oben beschrieben filtrieren, jedoch in umgekehrter Reihenfolge der Filter, wobei die Flüssigkeit zuerst durch den Membranfilter und dann durch den Vorfilter strömt. Die Filtration muss langsam und gleichmäßig erfolgen, indem mäßiger und konstanter Druck auf den Kolben der Spritze ausgeübt wird. Öffnen Sie nach vollständiger Filtration den Träger, entfernen Sie den Membranfilter und trocknen Sie ihn mit Filterpapier. Behandeln Sie die Standardlösung parallel dazu auf die gleiche Weise wie die Probenlösung.
Akzeptanzkriterien: Die Farbe des Flecks aus der Probenlösung ist nicht intensiver als die aus der Standardlösung (NMT 20 ppm).
SPEZIFISCHE TESTS
• Wasserbestimmung, Methode Ia<921>
Beispiellösung:
0,50 g in einer Mischung aus Methanol und Formamid (2:1)
Akzeptanzkriterien: NMT 5,0 %
• Aussehen der Lösung
Probenlösung: 120 mg/ml Lactobionsäure
Standard-Stammlösung: Pipettieren Sie 24,0 ml Eisenchlorid CS und 6,0 ml Kobaltchlorid CS in einen 100-ml-Messkolben. Mit 1 %iger (w/v) Salzsäure auf das Volumen verdünnen.
Referenzlösung: Pipettieren Sie 12,5 ml der Standard-Stammlösung in einen 100-ml-Messkolben. Mit 1 %iger (w/v) Salzsäure auf das Volumen verdünnen.
Akzeptanzkriterien: Die Probenlösung ist klar und nicht intensiver gefärbt als die Referenzlösung.
• Optische Rotation, spezifische Rotation<781S>
Probenlösung: 10 mg/ml Lactobionsäure. 24 Stunden stehen lassen.
Akzeptanzkriterien: +23,0 bis +29,0 (wasserfreie Substanz)
• Zucker reduzieren
Probenlösung: 5,0 g Lactobionsäure in 25 ml Wasser unter sanfter Hitze auflösen und abkühlen lassen.
Analyse: Zur Probenlösung 20 ml Kupfercitrat TS und einige Glasperlen hinzufügen. Erhitzen Sie das Ganze so, dass es nach 4 Minuten zu kochen beginnt, und lassen Sie es 3 Minuten lang weiterkochen. Schnell abkühlen lassen und 100 ml einer 2,4 %igen Lösung von Eisessig und 20,0 ml 0,025 M Jod VS hinzufügen. Unter ständigem Schütteln 25 ml einer Mischung aus 6 ml Salzsäure und 94 ml Wasser hinzufügen. Wenn sich der Niederschlag aufgelöst hat, titrieren Sie das überschüssige Jod mit 0,05 M Natriumthiosulfat VS unter Verwendung von 1 ml Stärke TS, die gegen Ende der Titration als Indikator hinzugefügt wird.
Akzeptanzkriterien: NLT 12,8 ml 0,05 M Natriumthiosulfat VS sind erforderlich, entsprechend NMT 0,2 % reduzierender Zucker, als Glucose.
• Artikel botanischen Ursprungs, Gesamtasche 561: NMT 0,2 %
ZUSÄTZLICHE ANFORDERUNGEN
• Verpackung und Lagerung: In gut verschlossenen Behältern aufbewahren.
• USP-Referenzstandards<11>
USP Lactobionsäure RS