Selenomethionin
C5H11NO2Se 196,11
(S)-2-Amino-4-(methylselenyl)buttersäure [1464-42-2].
DEFINITION
Selenomethionin enthält NLT 97,0 % und NMT 103,0 % Selenomethionin (C5H11NO2Se) und enthält NLT 39,0 % und NMT 41,0 % Selen (Se), berechnet auf der Ist-Basis.
IDENTIFIZIERUNG
• A. Infrarotabsorption<197K>
TEST
• Vorgehensweise
Mobile Phase: 6,8 g/L monobasisches Kaliumphosphat in Wasser. Mit Phosphorsäure einen pH-Wert von 2,75 ± 0,25 einstellen.
Systemeignungslösung: 0,16 mg/ml USP Selenomethionin RS und 0,8 mg/ml USP L-Methionin RS in der mobilen Phase
Standardlösung: 0,16 mg/ml USP Selenomethionin RS in der mobilen Phase
Probenlösung: 0,16 mg/ml Selenomethionin in der mobilen Phase mit Ultraschallbehandlung. Durch einen Membranfilter mit einer Porengröße von 0,45 µm laufen lassen.
Chromatographisches System
(Siehe Chromatographie<621>, Systemeignung.)
Modus: LC
Detektor: UV 220 nm
Säule: 4,6 mm × 25 cm; Packung L1 mit polarer Endkappe
Flussrate: 1 ml/min
Injektionsgröße: 20 µL
Systemtauglichkeit
Beispiel: Systemgerechte Lösung
[Hinweis-Die relativen Retentionszeiten für Methionin und Selenomethionin betragen 0,8 bzw. 1,0.]
Eignungsanforderungen
Auflösung: NLT 3,0 zwischen Methionin und Selenomethionin
Tailing-Faktor: NMT 2,0 für den Selenomethionin-Peak
Relative Standardabweichung: NMT 2,0 % für den Selenomethionin-Peak
Analyse
Proben: Standardlösung und Musterlösung
Berechnen Sie den Prozentsatz an Selenomethionin (C5H11NO2Se) in der aufgenommenen Portion Selenomethionin:
Ergebnis = (rU/rS) × (CS/CU) × 100
rU= Spitzenreaktion der Probenlösung
rS= Spitzenreaktion der Standardlösung
CS = Konzentration von USP Selenomethionin RS in der Standardlösung (mg/ml)
CU = Konzentration von Selenomethionin in der Probenlösung (mg/ml)
Akzeptanzkriterien: 97,0 %-103,0 % auf der Ist-Basis
VERUNREINIGUNGEN
• Schwermetalle, Methode I<231>: NMT 20 ppm
• Grenzwert für Natrium
Standard-Stammlösung: 10 µg/ml Natrium aus Natriumchlorid, zuvor 2 Stunden bei 105 getrocknet
Standardlösungen: 0,2, 0,5 und 1,0 µg/ml Natrium. Pipettieren Sie 2,0, 5,0 und 10,0 ml der Standard-Stammlösung in separate 100-ml-Messkolben. In jeden Kolben 2,0 ml Kaliumchloridlösung (1 zu 5) und 1,0 ml Salzsäure geben und mit Wasser auf das Volumen verdünnen.
Probenlösung: 100 mg Selenomethionin in einen 100-ml-Messkolben geben, 2,0 ml Kaliumchloridlösung (1 zu 5) und 1,0 ml Salzsäure hinzufügen und mit Wasser auf das Volumen verdünnen.
Instrumentelle Bedingungen
(Siehe Spektrophotometrie und Licht-Streuung<851>.)
Modus: Atomabsorptionsspektrophotometrie
Analytische Wellenlänge: 589 nm
Lampe: Natriumhohlkathode
Flamme: Luft – Acetylen
Analyse
Proben: Standardlösungen und Musterlösung
Bestimmen Sie die Extinktionen der Lösungen. Tragen Sie die Extinktionen der Standardlösungen gegen ihre Konzentrationen (µg/ml Natrium) auf und zeichnen Sie die gerade Linie, die am besten zu den aufgetragenen Punkten passt. Bestimmen Sie anhand der so erhaltenen Grafik die Konzentration von Natrium, CNa (µg/ml), in der Probenlösung.
Berechnen Sie den Natriumanteil in der eingenommenen Portion Selenomethionin:
Ergebnis = (CNa/CSA) × F × 100
CNa = Natriumkonzentration in der Probenlösung (µg/ml), bestimmt aus der Regressionslinie
CSA= Konzentration von Selenomethionin in der Probenlösung (mg/ml)
F = Umrechnungsfaktor, 0,001 mg/µg
Akzeptanzkriterien: NMT 0,1 %
• Chromatografische Reinheit
Standardlösung A: Übertragen Sie 50 mg USP Selenomethionin RS in einen 10-ml-Messkolben, geben Sie 2 ml Wasser hinzu, erwärmen Sie es bei Bedarf zum Auflösen und verdünnen Sie es mit Methanol auf das Volumen.
Standardlösung B: 1,0 ml Standardlösung A in einen 100-ml-Messkolben überführen und mit Methanol auf das Volumen verdünnen.
Probenlösung: 50 mg Selenomethionin in einen 10-ml-Messkolben geben, 2 ml Wasser hinzufügen, bei Bedarf zum Auflösen erwärmen und mit Methanol auf das Volumen verdünnen.
Chromatographisches System
(Siehe Chromatographie<621>, Systemeignung.)
Modus: TLC
Absorptionsmittel: 0,25 mm dicke Schicht einer chromatographischen Kieselgelmischung
Auftragsvolumen: 10 µL
Entwicklungslösungsmittel: Butanol, Eisessig und Wasser (4:1:1)
Sprühreagenz: 2 mg/ml Ninhydrin in Alkohol
Analyse
Proben: Standardlösung A, Standardlösung B und Probenlösung
Gehen Sie wie für Chromatographie<621>, Dünnschichtchromatographie beschrieben vor. Lassen Sie die Flecken trocknen und entwickeln Sie das Chromatogramm im Entwicklungslösungsmittel, bis sich die Lösungsmittelfront über drei Viertel der Länge der Platte bewegt hat. Nehmen Sie die Platte aus der Entwicklungskammer, markieren Sie die Lösungsmittelfront und lassen Sie das Lösungsmittel verdunsten. Lokalisieren Sie die Flecken auf der Platte, indem Sie Sprühreagenz aufsprühen und 10 Minuten lang bei 110 °C trocknen.
Akzeptanzkriterien: NMT 1,0 %. Der RF-Wert des Hauptflecks der Probenlösung entspricht dem der Standardlösung A; und kein Fleck außer dem Hauptfleck der Probenlösung ist größer oder intensiver als der Hauptfleck der Standardlösung B.
SPEZIFISCHE TESTS
• Optische Rotation, spezifische Rotation<781S>
Probenlösung: 10 mg/ml in 1 N Salzsäure
Akzeptanzkriterien: +17,0 bis +19,5
• Gehalt an Selen
[Vorsicht-Selen ist giftig; Gehen Sie vorsichtig damit um.]
Standard-Stammlösung: 1 g metallisches Selen in einer minimalen Menge Salpetersäure auflösen. Zur Trockne eindampfen, 2 ml Wasser hinzufügen und zur Trockne eindampfen. Wiederholen Sie die Wasserzugabe und das Eindampfen bis zur Trockne dreimal. Lösen Sie den Rückstand in 3 N Salzsäure, übertragen Sie ihn in einen 1000 ml-Messkolben und verdünnen Sie ihn mit 3 N Salzsäure auf das Volumen. Diese Lösung enthält 1000 µg/ml Selen.
Standardlösungen: 20, 50 und 100 µg/ml Selen. Pipettieren Sie 2,0, 5,0 und 10,0 ml der Standard-Stammlösung in separate 100-ml-Messkolben. Verdünnen Sie den Inhalt jedes Kolbens mit Wasser auf sein Volumen.
Probenlösung: 0,125 mg/ml Selenomethionin in Wasser
Instrumentelle Bedingungen
(Siehe Spektrophotometrie und Licht-Streuung<851>.)
Modus: Atomabsorptionsspektrophotometrie
Analytische Wellenlänge: 196 nm
Lampe: Selen-Hohlkathode
Flamme: Luft-Acetylen
Leer: Wasser
Analyse
Proben: Standardlösungen und Musterlösung
Bestimmen Sie die Extinktionen der Lösungen. Tragen Sie die Extinktionen der Standardlösungen gegen ihre Konzentrationen (µg/ml Selen) auf und zeichnen Sie die gerade Linie, die am besten zu den aufgetragenen Punkten passt. Bestimmen Sie anhand der so erhaltenen Grafik die Konzentration von Selen, CSe (µg/ml), in der Probenlösung.
Berechnen Sie den Selenanteil in der eingenommenen Portion Selenomethionin:
Ergebnis = (CSe/CSA) × F × 100
CSe = Konzentration von Selen in der Probenlösung (µg/ml), bestimmt aus der Regressionslinie
CSA= Konzentration von Selenomethionin in der Probenlösung (mg/ml)
F = Umrechnungsfaktor, 0,001 mg/µg
Akzeptanzkriterien: 39,0 %-41,0 % auf der Ist-Basis
ZUSÄTZLICHE ANFORDERUNGEN
• Verpackung und Lagerung: In gut verschlossenen Behältern aufbewahren.
• USP-Referenzstandards<11>
USP L-Methionin RS
USP Selenomethionin RS