Glutathion
C10H17N3O6S 307,32
Pentansäure, 2-Amino-5-[(R)-1-(Carboxymethylamino)-3-Mercapto-1-Oxopropan-2-ylamino]-5-Oxo, (S);
N-(N-l--Glutamyl-l-cysteinyl)glycin [70-18-8].
DEFINITION
Glutathion enthält 98,0 % NLT und 101,0 % NMT von C10H17N3O6S, als Glutathion, berechnet auf Trockenbasis.
IDENTIFIZIERUNG
• A. Infrarotabsorption<197K>
• B. Optische Rotation, spezifische Rotation<781S>
Probenlösung: 40 mg/ml in Wasser
Akzeptanzkriterien: 15,5° bis 17,5°, bei 20℃
TEST
• Vorgehensweise
Probe: 500 mg Glutathion, zuvor getrocknet
Titrimetrisches System
(Siehe Titrimetrie<541>.)
Modus: Direkte Titration
Titriermittel: 0,1 N Jod VS
Endpunkterkennung: Visuell
Leerwert: 50 ml Metaphosphorsäure (1 von 50)
Analyse: Lösen Sie die Probe in 50 ml Metaphosphorsäure (1 zu 50) und titrieren Sie mit dem Titriermittel.
Berechnen Sie den prozentualen Anteil an Glutathion (C10H17N3O6S) in der aufgenommenen Portion Glutathion:
Ergebnis = [(V B) × N × F × 100]/W
V = Titriermittelvolumen der Probe (ml)
B = Titriermittelvolumen des Blindwerts (ml)
N = Titriermittelnormalität (mEq/ml)
F = Äquivalenzfaktor, 307,32 mg/mEq
W = Gewicht der Probe (mg)
Akzeptanzkriterien: 98,0 % bis 101,0 % auf Trockenbasis
VERUNREINIGUNGEN
Anorganische Verunreinigungen
• Ammonium
Standardlösung: 10 µg Ammonium aus einer verdünnten Ammoniumchloridlösung
Probenlösung: 50 mg Glutathion
Analyse: Übertragen Sie die Probenlösung und die Standardlösung in separate 25-ml-Gläser mit Deckel und lösen Sie sie in 1 ml Wasser auf. 0,30 g Magnesiumoxid hinzufügen. Verschließen Sie die Kappen sofort, nachdem Sie ein mit einigen Tropfen Wasser befeuchtetes Stück Silbermanganpapier von 5 mm im Quadrat unter die Kappen gelegt haben. Umrühren, Flüssigkeitsspritzer vermeiden und 30 Minuten bei 40 °C stehen lassen.
Akzeptanzkriterien: Wenn das Silbermanganpapier eine graue Farbe aufweist, ist diese nicht intensiver als der Standard (NMT 200 ppm).
• Arsen<211>: NMT 2 ppm
• Chlorid und Sulfat, Chlorid<221>: 0,7 g mit Wasser auflösen, um 15 ml herzustellen. Die Lösung weist nicht mehr Chlorid auf, als 0,20 ml 0,020 N Salzsäure (NMT 200 ppm) entspricht.
• Chlorid und Sulfat, Sulfat 221: 0,8 g in Wasser auflösen, um 15 ml herzustellen. Die Lösung weist nicht mehr Sulfat auf, als 0,25 ml 0,020 N Schwefelsäure (NMT 300 ppm) entspricht.
• Schwermetalle, Methode I<231>: NMT 10 ppm
• Eisen<241>: NMT 10 ppm
• Rückstände bei der Zündung<281>: NMT 0,1 %
Organische Verunreinigungen
• Vorgehensweise
Mobile Phase: 6,8 g/L Kaliumdihydrogenphosphat mit 2,02 g/L Natrium-1-heptansulfonat. Mit Phosphorsäure einen pH-Wert von 3,0 einstellen. Mischen Sie 970 ml dieser Lösung mit 30 ml Methanol.
Systemeignungslösung: 0,1 mg/ml USP l-Phenylalanin RS, 0,5 mg/ml USP Glutathion RS und 0,5 mg/ml USP Ascorbinsäure RS in der mobilen Phase
Standardlösung: 0,01 mg/ml USP Glutathion RS in der mobilen Phase. [Hinweis: Diese Lösung hat eine Konzentration, die 2,0 % der Konzentration der Probenlösung entspricht. ]
Probenlösung: 50 mg Glutathion in 100 ml mobiler Phase. [Hinweis: Lassen Sie die Lösung vor der Verwendung 5 Minuten lang stehen. ]
Chromatographisches System
(Siehe Chromatographie<621>, Systemeignung.)
Modus: LC
Detektor: UV 210 nm
Säule: 4,6 mm × 15 cm; 5-µm Packung L1
Säulentemperatur: 30
Flussrate: Stellen Sie sie so ein, dass die Retentionszeit von Glutathion etwa 5 Minuten beträgt.
Injektionsgröße: 10 µL
Systemtauglichkeit
Beispiel: Systemgerechte Lösung
Eignungsanforderungen
Auflösung: NLT 5,0 zwischen den Ascorbinsäure- und Glutathion-Peaks; und NLT 5,0 zwischen den Glutathion- und l-Phenylalanin-Peaks
Relative Standardabweichung: NMT 1,5 % für wiederholte Injektionen
Analyse
Proben: Standardlösung und Musterlösung
Berechnen Sie den Prozentsatz etwaiger Verunreinigungen in der aufgenommenen Glutathionmenge:
Ergebnis = (rU/rS) × (CS/CU) × 100
rU = Peak-Reaktion eines beliebigen Peaks aus der Probenlösung außer Glutathion
rS = Peak-Reaktion des Glutathion-Peaks aus der Standardlösung
CS = Konzentration von USP Glutathion RS in der Standardlösung (mg/ml)
CU = Glutathionkonzentration in der Probenlösung (mg/ml)
Akzeptanzkriterien
Einzelne Verunreinigung: NMT 1,5 % für die Verunreinigung mit einer relativen Retentionszeit von etwa 4
Gesamtverunreinigungen: NMT 2,0 %
SPEZIFISCHE TESTS
• Klarheit und Farbe der Lösung
Probenlösung: 0,1 g/ml in Wasser
Analyse: Vergleichen Sie die zu untersuchende Flüssigkeit in identischen Röhrchen aus farblosem, transparentem, neutralem Glas mit flachem Boden und einem Innendurchmesser von 15 - 25 mm mit Wasser, wobei die Schichttiefe 40 mm beträgt. Vergleichen Sie die Farben bei diffusem Tageslicht und betrachten Sie es vertikal vor einem weißen Hintergrund.
Akzeptanzkriterien: Die Lösung ist klar und farblos.
• Trocknungsverlust<731>: NMT 0,5 %, 105℃ für 3 Stunden
ZUSÄTZLICHE ANFORDERUNGEN
• Verpackung und Lagerung: In dichten Behältern aufbewahren.
• USP-Referenzstandards<11>
USP Ascorbinsäure RS
USP Glutathion RS
USP l-Phenylalanin RS