GENTAMICINSULFAT
[1405-41-0]
DEFINITION
Mischung aus Sulfaten antimikrobieller Substanzen, die von Micromonospora purpurea produziert werden, wobei die Hauptbestandteile die Gentamicine C1, C1a, C2, C2a und C2b sind.
Inhalt: mindestens 590 IE/mg (wasserfreie Substanz).
CHARAKTERE
Aussehen: weißes oder fast weißes, hygroskopisches Pulver.
Löslichkeit: gut löslich in Wasser, praktisch unlöslich in Ethanol (96 Prozent).
IDENTIFIZIERUNG
Erste Identifizierung: B, C.
Zweite Identifikation: A, C.
A. Dünnschichtchromatographie (2.2.27).
Testlösung. Lösen Sie 25 mg der zu untersuchenden Substanz in Wasser R und verdünnen Sie es mit demselben Lösungsmittel auf 5 ml.
Referenzlösung. Lösen Sie den Inhalt einer Durchstechflasche mit Gentamicinsulfat CRS in Wasser R und verdünnen Sie es mit demselben Lösungsmittel auf 5 ml.
Platte: TLC-Kieselgelplatte R.
Mobile Phase: die untere Schicht einer Mischung aus gleichen Volumina konzentriertem Ammoniak R, Methanol R und Methylenchlorid R.
Anwendung: 10 μL.
Entwicklung: über 2/3 der Platte.
Trocknung: an der Luft.
Nachweis: Mit Ninhydrinlösung R1 besprühen und 5 Minuten lang auf 110 ℃ erhitzen.
Ergebnisse: Die drei Hauptflecken im mit der Testlösung erhaltenen Chromatogramm ähneln in Position, Farbe und Größe den drei Hauptflecken im mit der Referenzlösung erhaltenen Chromatogramm.
B. Untersuchen Sie die im Test erhaltenen Chromatogramme auf ihre Zusammensetzung.
Ergebnisse: Das mit der Testlösung (b) erhaltene Chromatogramm zeigt 5 Hauptpeaks mit den gleichen Retentionszeiten wie die 5 Hauptpeaks im mit der Referenzlösung (a) erhaltenen Chromatogramm.
C. Es ergibt sich die Reaktion (a) von Sulfaten (2.3.1).
TESTS
Lösung S. 0,8 g in kohlendioxidfreiem Wasser R auflösen und mit demselben Lösungsmittel auf 20 ml verdünnen.
Aussehen der Lösung. Lösung S ist klar (2.2.1) und nicht intensiver gefärbt als Intensität 6 des Bereichs von Referenzlösungen der am besten geeigneten Farbe (2.2.2, Methode II).
pH-Wert (2,2,3): 3,5 bis 5,5 für Lösung S.
Spezifische optische Drehung (2.2.7): + 107 bis + 121 (wasserfreie Substanz).
Lösen Sie 2,5 g in Wasser R auf und verdünnen Sie es mit demselben Lösungsmittel auf 25,0 ml.
Zusammensetzung. Flüssigkeitschromatographie (2.2.29): Verwenden Sie das Normalisierungsverfahren und berücksichtigen Sie dabei nur die Peaks, die auf die Gentamicine C1, C1a, C2, C2a und C2b zurückzuführen sind.
Testlösung (a). 25,0 mg der zu untersuchenden Substanz in der mobilen Phase lösen und mit der mobilen Phase auf 25,0 ml verdünnen.
Testlösung (b). Verdünnen Sie 5,0 ml der Testlösung (a) mit der mobilen Phase auf 25,0 ml.
Referenzlösung (a). Lösen Sie 5 mg Gentamicin zur Peakidentifikation CRS (enthaltend Verunreinigung B) in der mobilen Phase und verdünnen Sie es mit der mobilen Phase auf 25 ml.
Referenzlösung (b). Lösen Sie 20,0 mg Sisomicinsulfat CRS (Verunreinigung A) in der mobilen Phase und verdünnen Sie es mit der mobilen Phase auf 20,0 ml.
Referenzlösung (c). Verdünnen Sie 1,0 ml der Referenzlösung (b) mit der mobilen Phase auf 100,0 ml.
Referenzlösung (d). Zu 1 ml Referenzlösung (b) 5 ml Testlösung (a) hinzufügen und mit der mobilen Phase auf 50 ml verdünnen.
Spalte:
- Größe: l = 0,25 m, Ø = 4,6 mm;
- stationäre Phase: Octadecylsilyl-Kieselgel für die Chromatographie R (5 μm);
- Temperatur: 35℃.
Mobile Phase. Zu 900 ml kohlendioxidfreiem Wasser R 7,0 ml Trifluoressigsäure R, 250,0 μl Pentafluorpropansäure R und 4,0 ml carbonatfreies Wasser hinzufügen
Natriumhydroxidlösung R, äquilibrieren lassen und mit carbonatfreier Natriumhydroxidlösung R, verdünnt im Verhältnis 1 zu 25, auf einen pH-Wert von 2,6 einstellen. 15 ml Acetonitril R hinzufügen und verdünnen
1000,0 mL mit Kohlendioxid-freiem Wasser R.
Flussrate: 1,0 ml/min.
Nachsäulenlösung: 1 bis 25 verdünnte, zuvor entgaste carbonatfreie Natriumhydroxidlösung R, die mithilfe einer 375 μL-Polymermischwendel impulslos dem Säulenausfluss zugesetzt wird.
Flussrate der Nachsäulenlösung: 0,3 ml/min.