Inspektionsverfahren
1. Aussehen
-- Sichtprüfung
2. Reinheit (HPLC)
2.1 Instrument
Hochleistungsflüssigchromatographie, PDA-Detektor.
Elektronische Analysenwaage
2.2 Reagenz
Acetonitril (Chromatographiequalität), Trifluoressigsäure (Chromatographiequalität)
2.3 Chromatographische Bedingungen
2.3.1 Säule: YMC-ODS-AM, 5 μl, 250x4,6 mm
2.3.2 Erkennungswellenlänge: INC220nm
Flussrate: 1,0 ml/min
Probengröße: 10 μl (Referenz)
Verdünnungsmittel: Acetonitril
Datenerfassungszeit: 25.00 Min
2.4 Vorbereitung der mobilen Phase
Mobile Phase A (0,1 % Trifluoressigsäure-Wasser): Präzisionsabsorption 2. Oml Trifluoressigsäure mit Wasser auf 2000 ml verdünnen, gut mischen und entgasen;
Mobile Phase B (0,1 % Acetonitril-Trifluoressigsäure): präzise Absorption 2,0 ml Trifluoressigsäure wurden mit Acetonitril auf 2000 ml verdünnt, gemischt und entgast;
2.5 Gradientenprogramm der mobilen Phase
Zeit (Min.) A % B %
0,00 90 10
13.00 10 90
18.00 10 90
18.01 90 10
23.00 90 10
2.6 Vorbereitung der Probenlösung
0,1 g Probe abwiegen und mit Acetonitril auflösen und auf 100 ml verdünnen, zur Verwendung gut schütteln, oder die gleiche Konzentration verwenden. Bereiten Sie zwei Proben parallel vor.
2.7 Probenbestimmung
Analysieren Sie die Probe gemäß dem folgenden Probenahmeverfahren:
Mehr als eine Injektion der Blindlösung
1 Stich Musterlösung 1#
1 Stich Musterlösung 2#
2.8 Ergebnisberechnung
2.8.1 Die Methode der Peakflächennormalisierung wurde zur Berechnung der HPLC-Reinheit durch Abzug des Leerraums verwendet.
2.8.2 Die relative mittlere Reinheitsabweichung zweier Nadeln darf nicht größer als 1 % sein.
2.8.3 Wenn die Ergebnisse beider Injektionen die Akzeptanzkriterien erfüllen, wird die durchschnittliche Reinheit als Endergebnis verwendet.
3, Schmelzpunkt -- RY-1 Schmelzpunktmessgerät
4. Trocknungsverlust-Erkennungsmethode
4.1 Instrumente:
Elektrischer thermostatischer Trockenofen, eins zu zehntausend Gleichgewicht.
4.2 Vorgehensweise:
In einer flachen Wägeflasche mit geschliffenem Munddeckel bei konstantem Gewicht und Übertrocknung 1 Gramm Probe abwiegen (auf 0,0001 Gramm genau). Die Probe sollte gleichmäßig mit einer Dicke von nicht mehr als 10 mm auf dem Boden der Wägeflasche verteilt werden, in einen elektrischen Trockenofen mit konstanter Temperatur gegeben, 3 Stunden lang bei 105-110 °C getrocknet werden und dann in den Trockenraum gebracht, auf Raumtemperatur abgekühlt und gewogen werden.
Berechnung: Trockengewichtsverlust %= (M1-M2) ÷M×100
Wobei: M1: Masse der Probe und der Wägeflasche vor dem Trocknen, g
M2: Masse der Probe und des Wägegefäßes nach dem Trocknen, g
M: Probenmasse, Gramm
5. Spezifische Rotation
-- Die spezifische Rotation wird gemäß GB/T613-1988 gemessen
Probenvorbereitung: 0,5000 g Probe wurden genau abgewogen und in eine saubere und trockene 50-ml-Messflasche mit 20 ml Ethylacetat überführt. Die Flasche wurde verkorkt und geschüttelt, um das Ethylacetat aufzulösen.
Test: Stellen Sie den Nullpunkt des Gyroskops vor dem Test ein, füllen Sie dann das Reagenzglas mit Probenlösung, zeichnen Sie den Ablenkungsdrehwinkel auf und berechnen Sie die spezifische Drehung der Probe mithilfe der folgenden Formel.
[α]20/D= (r×50) ÷(L×B)
Wo:
[α]20/D: Spezifische Rotation der Probenlösung bei 25℃
r: Rotation beobachtet bei 25℃ für Probenlösung
50: Probenlösungsvolumen (ml) vorbereiten
w: Probengewicht (g)
L: Länge des optischen Rohrs (dm)
6. TCL-Analyse
Probenvorbereitung: 0,5000 g Probe wurden genau abgewogen und in eine saubere und trockene 50-ml-Messflasche gegeben, 40 ml EtoH wurden hinzugefügt, die Flasche wurde verschlossen und zum Auflösen geschüttelt und dann mit EtoH auf die Waage verdünnt.
Vorbereitung der Kontrollprobe: 0,5000 g Probe wurden genau abgewogen und in eine saubere und trockene 50-ml-Messflasche gegeben, 40 ml Wasser und 2 Tropfen 6 N Salzsäure wurden hinzugefügt, die Flasche wurde verschlossen und zum Auflösen geschüttelt und dann mit Wasser auf die Waage verdünnt. Nehmen Sie dann 0,5 % der oben genannten Flüssigkeit und verdünnen Sie diese mit Ethanol in einer 100-ml-Flasche zu einer Referenzprobe mit einem Aminosäurerückstand von 1,0 %.
Mit einer Mikroprobenspritze wurden 10-Mikroliter-Proben entnommen und auf die GF254-Silikonplatte gegeben. Als Vergleichspunkte wurden jeweils 5-Mikroliter-, 10-Mikroliter- und 15-Mikroliter-Punktplatten verwendet.
Entwicklungsmittel: n-Butanol: Eisessig: Wasser =4:1:1.
Farbentwicklungsmittel: 5 %ige Ninhydrin-Methanollösung.
Farbentwicklungsvorgang: Trocknen Sie die entwickelte Kieselgelplatte zunächst mit einem Fön, tauchen Sie sie dann in eine 5 %ige Ninhydrin-Methanol-Lösung, föhnen Sie sie dann trocken und backen Sie sie zur Farbentwicklung bei hoher Temperatur in einem Elektroofen.
Beurteilung: Sehen Sie sich die Farbdauer des Produkts, die Punktgröße, die Farbkonzentration und den Vergleich mit dem Kontrollprodukt an und beurteilen Sie, ob es in diesem Bereich liegt.