Trehalose
C12H22O11 342,30
C12H22O11·2H2O 378,33
α-D-Glucopyranosyl α-D-Glucopyranosid.
Wasserfrei [99-20-7].
Dihydrat [6138-23-4].
DEFINITION
Trehalose ist ein stabiles, nicht reduzierendes Disaccharid mit zwei Glucosemolekülen, die in einer α,α-1,1-Konfiguration verknüpft sind. Es wird durch enzymatische Umwandlung von Lebensmittelstärke gewonnen. Es enthält 97,0 % NLT und 102,0 % NMT von C12H22O11, berechnet auf wasserfreier Basis.
IDENTIFIZIERUNG
• A. Infrarotabsorption<197K>
• B.
Probenlösung: 400 mg/ml Trehalose
Analyse: 0,4 ml einer Lösung mit 1-Naphthol in 95 %igem Alkohol (1 zu 20) zu 1 ml der Probenlösung hinzufügen. Fügen Sie der Lösung vorsichtig 2 ml Schwefelsäure hinzu.
Akzeptanzkriterium: An der Grenzfläche zwischen den beiden Lösungen entsteht eine violette Farbe.
• C.
Glycinlösung: 40 mg/ml Glycin
Probenlösung: 40 mg/ml Trehalose
Analyse: 1 ml verdünnte Salzsäure zu 2 ml der Probenlösung hinzufügen. 20 Minuten bei Raumtemperatur stehen lassen. Fügen Sie der Probenlösung 4 ml Natriumhydroxid TS und 2 ml der Glycinlösung hinzu. Erhitzen Sie die Lösung 10 Minuten lang in kochendem Wasser.
Akzeptanzkriterien: Es entsteht keine Braunfärbung.
TEST
• Vorgehensweise
Mobile Phase: Wasser
Standardlösung: 10 mg/ml USP Trehalose RS, berechnet auf wasserfreier Basis
Probenlösung: 10 mg/ml Trehalose, berechnet auf wasserfreier Basis
Chromatographisches System
(Siehe Chromatographie<621>, Systemeignung.)
Modus: LC
Detektor: Brechungsindex
Säule: 8-mm × 30-cm; Verpackung L58
Temperatur
Detektor: 40
Spalte: 80
Flussrate: Stellen Sie sie so ein, dass die Retentionszeit der Trehalose etwa 15 Minuten beträgt.
Injektionsgröße: 20 µL
Systemtauglichkeit
Beispiel: Standardlösung
Eignungsanforderungen
Relative Standardabweichung: NMT 2,0 %
Analyse
Proben: Standardlösung und Musterlösung
Berechnen Sie den Prozentsatz an Trehalose (C12H22O11) in der eingenommenen Portion Trehalose:
Ergebnis = (rU/rS) × (CS/CU) × 100
rU = Spitzenreaktion der Probenlösung
rS = Spitzenreaktion der Standardlösung
CS = Konzentration von USP Trehalose RS in der Standardlösung (mg/ml)
CU = Konzentration von Trehalose in der Probenlösung (mg/ml)
Akzeptanzkriterien: 97,0 % - 102,0 % auf wasserfreier Basis
VERUNREINIGUNGEN
• Rückstand bei der Zündung<281>: NMT 0,1 %, bestimmt an 2,0 g Trehalose
• Schwermetalle, Methode I<231>
Probe: 4,0 g
Vorbereitung des Monitors: Mit 2,5 ml Standard-Bleilösung vorbereiten.
Akzeptanzkriterien: NMT 5 ppm
• Verwandte Substanzen
Mobile Phase und chromatographisches System: Bereiten Sie es wie im Test beschrieben vor.
Probenlösung: 10 mg/ml Trehalose
Standardlösung: 0,1 mg/ml Probenlösung
Lösung zur Systemeignung: 2,5 ml Probenlösung, 25 mg Maltotriose und 25 mg Glucose auflösen und mit Wasser auf 10,0 ml verdünnen.
Systemtauglichkeit
Beispiel: Systemgerechte Lösung
[Hinweis-Die relativen Retentionszeiten für Maltotriose, Trehalose und Glucose betragen etwa 0,9, 1,0 bzw. 1,2.]
Eignungsanforderungen
Auflösung: NLT 1,5 zwischen Trehalose und Maltotriose
Relative Standardabweichung: NMT 2,0 % für den Trehalose-Peak
Analyse
Proben: Musterlösung und Standardlösung
Bestimmen Sie die Peakflächen für alle Peaks.
Akzeptanzkriterien: Für die Probenlösung betragen die Flächen aller Peaks, die Maltotriose und anderen Polysacchariden entsprechen und vor Trehalose eluieren, NMT der Hälfte der Fläche des Peaks, der Trehalose im Chromatogramm der Standardlösung entspricht (0,5 %). Die Flächen aller Peaks, die Glucose entsprechen und nach Trehalose eluieren, entsprechen der NMT-Hälfte der Peakfläche, die Trehalose im Chromatogramm der Standardlösung entspricht (0,5 %).
SPEZIFISCHE TESTS
• Farbe und Klarheit der Lösung
Probenlösung: 33 g Trehalose in 67 g frisch gekochtem Wasser
Analyse
Messen Sie mit einem geeigneten Spektrophotometer (siehe Spektrophotometrie und Licht-Streuung 851) die Absorptionen der Probenlösung bei 420 und 720 nm in einer 10-cm-Küvette. Die Absorption der Probenlösung bei 720 nm beträgt NMT 0,050.
Bestimmen Sie die Extinktionsdifferenz:
Ergebnis = A420 A720
A420 = Absorption der Probenlösung bei 420 nm
A720 = Absorption der Probenlösung bei 720 nm
Akzeptanzkriterien: Die Extinktionsdifferenz beträgt NMT 0,100.
• Optische Drehung, spezifische Drehung<781S>: +197° bis +201° bei 20
Probenlösung: 100 mg/ml
• Mikrobenzählungstests<61>und Tests für bestimmte Mikroorganismen<62>: Die Gesamtzahl der aeroben Mikroben beträgt NMT 100 KBE/g, und die Gesamtzahl der kombinierten Schimmelpilze und Hefen beträgt NMT 100 KBE/g. Es erfüllt die Anforderungen der Tests auf Abwesenheit von Salmonellenarten und Escherichia coli.
• pH<791>
Probenlösung: 100 mg/ml
Akzeptanzkriterien: 4,5-6,5
• Wasserbestimmung, Methode I<921>: Für die wasserfreie Form NMT 1,0 %; für die Dihydratform 9,0 %-11,0 %
Probe: 0,1 g
• Test auf bakterielle Endotoxine<85>: Wenn er für die Verwendung bei der Herstellung parenteraler Dosierungsformen gekennzeichnet ist, erfüllt er auch die folgenden Anforderungen. Der Gehalt an bakteriellen Endotoxinen ist so hoch, dass die Anforderungen der jeweiligen Dosierungsformmonographie(n), in denen Trehalose verwendet wird, erfüllt werden können. Wenn auf dem Etikett angegeben ist, dass Trehalose bei der Herstellung injizierbarer Darreichungsformen einer weiteren Verarbeitung unterzogen werden muss, ist der Gehalt an bakteriellen Endotoxinen so hoch, dass die Anforderungen in der/den relevanten Darreichungsformmonographie(n), in denen Trehalose verwendet wird, erfüllt werden können.
• Chlorid und Sulfat, Chlorid<221>: Eine Probe von 2,0 g weist nicht mehr Chlorid auf, als 0,70 ml 0,01 M Salzsäure (NMT 0,0125 %) entspricht.
• Chlorid und Sulfat, Sulfat<221>: Eine Probe von 2,0 g weist nicht mehr Sulfat auf, als 0,83 ml 0,005 M Schwefelsäure (NMT 0,0200 %) entspricht.
• Stickstoffgehalt, Methode I<461>
Probe: 5,0 g
Analyse: Gehen Sie wie bei Methode I beschrieben vor, indem Sie die für den Aufschluss verwendete Schwefelsäure auf 30 ml erhöhen und die Natriumhydroxidlösung (2 von 5) auf 45 ml reduzieren.
Akzeptanzkriterien: NMT 0,005 %
• Lösliche Stärke
Probenlösung: 10 % Trehalose (w/v)
Analyse: Geben Sie mehrere Tropfen Jod TS zur Probenlösung.
Akzeptanzkriterien: Es entsteht keine Blaufärbung.
ZUSÄTZLICHE ANFORDERUNGEN
• Verpackung und Lagerung: In dichten Behältern aufbewahren. Keine Speicheranforderungen angegeben.
• Kennzeichnung: Wenn Trehalose für die Herstellung injizierbarer Dosierungsformen vorgesehen ist, ist es entsprechend gekennzeichnet. Wenn Trehalose bei der Herstellung injizierbarer Darreichungsformen einer weiteren Verarbeitung unterzogen werden muss, um akzeptable Mengen an bakteriellen Endotoxinen sicherzustellen, ist dies entsprechend gekennzeichnet.
• USP-Referenzstandards<11>
USP Endotoxin RS
USP Glycerin RS
USP Trehalose RS