Penicillamin
C5H11NO2S 149,21
d-Valin, 3-Mercapto-.
d-3-Mercaptovalin [52-67-5].
» Penicillamin enthält nicht weniger als 97,0 Prozent und nicht mehr als 102,0 Prozent C5H11NO2S, berechnet auf der Trockenbasis.
Verpackung und Lagerung- In dichten Behältern aufbewahren.
USP-Referenzstandards<11>-
USP Penicillamin RS
USP Penicillin G Kalium RS
USP Penicillamindisulfid RS
C10H20N2O4S2
Identifikation-
A: Infrarotabsorption<197M>(50 mg in 300 mg).
B: 10 mg in 5 ml Wasser auflösen und 1 Tropfen 5 N Natriumhydroxid und 20 mg Ninhydrin hinzufügen: Es entsteht sofort eine blaue oder violette/blaue Farbe.
C: 20 mg in 4 ml Wasser auflösen, 2 ml Phosphorwolframsäurelösung (1 zu 10) hinzufügen und fast bis zum Sieden erhitzen: Es entsteht sofort eine tiefblaue Farbe.
Spezifische Drehung<781S>: zwischen 60,5 und 64,5.
Testlösung: 50 mg pro ml in 1,0 N Natriumhydroxid.
pH<791>: zwischen 4,5 und 5,5, in einer Lösung (1 zu 100).
Trocknungsverlust<731>- Etwa 100 mg, genau abgewogen, in einer mit Kapillaren verschlossenen Flasche im Vakuum bei einem Druck von nicht mehr als 5 mm Quecksilbersäule bei 60 °C 3 Stunden lang trocknen lassen: Es verliert nicht mehr als 0,5 % seines Gewichts.
Glührückstand<281>: nicht mehr als 0,1 %, der verkohlte Rückstand wird mit 2 ml Salpetersäure und 5 Tropfen Schwefelsäure angefeuchtet.
Schwermetalle, Methode II<231>: nicht mehr als 0,002 %.
Grenze der Penicillin-Aktivität-
Puffer pH 2,5- 100 g einbasiges Kaliumphosphat in Wasser auflösen, 0,2 ml Salzsäure hinzufügen, mit Wasser auf 1000 ml verdünnen und mischen. Bei Bedarf mit Phosphorsäure oder mit 10 N Kaliumhydroxid einen pH-Wert von 2,5 einstellen.
Standardvorbereitung- Bereiten Sie sich wie für Penicillin G in Tabelle 1 unter „Antibiotika-Mikrobielle Tests 81“ beschrieben vor, mit der Ausnahme, dass Sie eine endgültige Stammlösung mit 100 Penicillin-G-Einheiten pro ml und sechs Testverdünnungen im Bereich von 0,005 Penicillin-G-Einheiten pro ml bis 0,2 Penicillin-G-Einheiten pro ml vorbereiten und eine mittlere Dosis des Standards von 0,050 Penicillin-G-Einheiten pro ml verwenden.
Prüfungsvorbereitung- Lösen Sie 1,0 g in Wasser auf, um 18,0 ml zu erhalten, geben Sie 9,0 ml dieser Lösung in einen Separator, geben Sie 20 ml Amylacetat und 1 ml Puffer mit pH-Wert 2,5 hinzu und schütteln Sie. Lassen Sie die Schichten sich trennen und ziehen Sie die wässrige Schicht in einen zweiten Separator ab, wobei Sie den Amylacetatextrakt im ersten Separator zurückhalten. Überprüfen Sie den pH-Wert der wässrigen Schicht. Wenn er größer als 3,0 ist, stellen Sie ihn mit Salzsäure auf einen pH-Wert von 2,5 ein und extrahieren Sie mit 20 ml Amylacetat. Verwerfen Sie die wässrige Schicht und geben Sie den Amylacetatextrakt in den ersten Separator. Waschen Sie die kombinierten Amylacetatextrakte mit 10 ml verdünntem pH-2,5-Puffer (1 zu 10) und verwerfen Sie die wässrige Schicht. Extrahieren Sie das Amylacetat mit 10,0 ml Puffer Nr. 1 (siehe Phosphatpuffer und andere Lösungen im Abschnitt „Medien und Verdünnungsmittel“ unter „Antibiotika – Mikrobielle Tests 81“). Verwenden Sie einen Teil des Pufferextrakts als Testlösung A. Zu einer 5-ml-Portion des Extrakts 0,1 ml Penicillinase-Lösung hinzufügen und 60 Minuten bei 36 bis 37,5 °C inkubieren (Testlösung B).
Vorbereitung des Inokulums- Bereiten Sie es wie unter „Antibiotika-Mikrobielle Tests 81“ beschrieben vor und verwenden Sie Micrococcus luteus (ATCC 9341) als Testorganismus und ein Inokulum, das bei der mittleren Dosis des Standards klare, scharfe Hemmzonen mit einem Durchmesser von 17 mm bis 21 mm ergibt.
Vorgehensweise- Gehen Sie wie für die Zylinder-Platten-Methode unter Antibiotika-Mikrobielle Tests 81 beschrieben vor, verwenden Sie 10 ml Medium 1 für die Basisschicht und 4 ml beimpftes Medium 4 für die Keimschicht und inkubieren Sie die Platten bei 29 bis 31 °C, mit der Ausnahme, dass auf jeder Testplatte 2 Zylinder mit Testlösung A, 2 Zylinder mit Testlösung B und 2 Zylinder mit der mittleren Dosis des Standards gefüllt werden. Wenn Testlösung A keine Hemmzone ergibt, ist der Test negativ für Penicillin. Wenn Testlösung A eine Hemmzone ergibt und Testlösung B nicht, ist Penicillin vorhanden. Bestimmen Sie den Gehalt anhand der Standardkurve: In jedem ml der Testlösung A sind nicht mehr als 0,01 Penicillin-G-Einheiten enthalten (0,2 Penicillin-G-Einheiten pro g).
Merkur-
[Anmerkung-Quecksilberdithizonat ist lichtempfindlich. Führen Sie diesen Test bei gedämpftem Licht durch.]
Dithizon-Stammlösung- Lösen Sie 40 mg Dithizon in 1000 ml Chloroform auf.
Dithizon-Titriermittel- Verdünnen Sie 30,0 ml Dithizon-Stammlösung mit Chloroform auf 100,0 ml. Diese Lösung enthält etwa 12 mg Dithizon pro Liter.
Standardlösung- Übertragen Sie 135,4 mg Quecksilberchlorid in einen 100-ml-Messkolben, geben Sie 0,25 N Schwefelsäure zum Volumen hinzu und mischen Sie. Diese Lösung enthält das Äquivalent von 100 mg Hg in 100 ml.
Verdünnte Standardlösung- Pipettieren Sie 2 ml Standardlösung in einen 100-ml-Messkolben, geben Sie 0,25 N Schwefelsäure zum Volumen hinzu und mischen Sie. Jeder ml dieser Lösung enthält das Äquivalent von 20 µg Hg.
Standardisierung- Pipettieren Sie 1 ml der verdünnten Standardlösung in einen 250-ml-Separator und fügen Sie 100 ml 0,25 N Schwefelsäure, 90 ml Wasser und 10 ml Hydroxylaminhydrochloridlösung hinzu (1 zu 5). Dann 1 ml Edetat-Dinatriumlösung (1 zu 50), 1 ml Eisessig und 5 ml Chloroform hinzufügen, 1 Minute lang schütteln, abtrennen lassen und die Chloroformschicht verwerfen. Zu der Lösung Dithizon-Titriermittel in Portionen von 0,3 ml bis 0,5 ml aus einer 10-ml-Bürette hinzufügen. Schütteln Sie die Mischung nach jeder Zugabe 20 Mal, lassen Sie die Chloroformschicht abtrennen und entsorgen Sie sie. Fahren Sie fort, bis eine Zugabe von Dithizon-Titriermittel nach dem Schütteln grün bleibt. Berechnen Sie die Quecksilbermenge in µg, die 1 ml Dithizon-Titriermittel entspricht, indem Sie 20 durch die Anzahl der hinzugefügten ml Dithizon-Titriermittel dividieren.
Vorgehensweise- Übertragen Sie 500 mg Penicillamin in einen 650-ml-Kjeldahl-Kolben mit einigen Glasperlen, neigen Sie den Kolben in einem Winkel von etwa 45 ° und geben Sie 2,5 ml Salpetersäure durch einen kleinen Trichter in die Flaschenöffnung hinzu. Lassen Sie die Mischung bei Raumtemperatur stehen, bis sich Lachgasdämpfe entwickeln und die heftige Reaktion nachlässt (5 bis 30 Minuten). Geben Sie 2,5 ml Schwefelsäure durch den Trichter hinzu und erhitzen Sie es zunächst vorsichtig, dann bis zur Bildung von Schwefeltrioxiddämpfen, und kühlen Sie es dann ab. Geben Sie vorsichtig 2,5 ml Salpetersäure hinzu, erhitzen Sie es erneut, bis Schwefeltrioxiddämpfe entstehen, und kühlen Sie es ab. Wiederholen Sie die Behandlung mit Salpetersäure und erhitzen Sie sie, kühlen Sie dann ab und fügen Sie vorsichtig 50 ml Wasser hinzu, spülen Sie den Trichter aus und sammeln Sie die Spülflüssigkeit im Kolben. Entfernen Sie den Trichter, kochen Sie die Lösung auf etwa die Hälfte ihres Volumens (ca. 25 ml) ein und lassen Sie sie auf Raumtemperatur abkühlen. Mit Hilfe von Wasser in einen 250-ml-Separator überführen und Wasser hinzufügen, um etwa 50 ml zu erhalten. Fügen Sie 1 ml Edetat-Dinatriumlösung (1 zu 50) und 1 ml Eisessig hinzu und extrahieren Sie mit kleinen Portionen Chloroform, bis der letzte Chloroformextrakt farblos bleibt. Entsorgen Sie den Chloroformextrakt und geben Sie 50 ml 0,25 N Schwefelsäure, 90 ml Wasser und 10 ml Hydroxylaminhydrochloridlösung hinzu (1 zu 5). Geben Sie Dithizon-Titriermittel in Portionen von 0,3 ml bis 0,5 ml aus einer 10-ml-Bürette hinzu. Schütteln Sie die Mischung nach jeder Zugabe 20 Mal, lassen Sie die Chloroformschicht abtrennen und entsorgen Sie sie. Fahren Sie fort, bis eine Zugabe von Dithizon-Titriermittel nach dem Schütteln grün bleibt. Berechnen Sie die Menge des vorhandenen Quecksilbers: Der Grenzwert liegt bei 10 µg (0,002 %).
Grenzwert von Penicillamindisulfid-
Verdünnungsmittel, mobile Phase und Auflösungslösung - Wie im Test beschrieben vorbereiten.
Standardvorbereitung- Lösen Sie eine genau abgewogene Menge USP Penicillamindisulfid RS in Verdünnungsmittel auf, um eine Lösung mit einer bekannten Konzentration von etwa 0,025 mg pro ml zu erhalten.
Prüfungsvorbereitung- Verwenden Sie die Testvorbereitung.
Chromatographisches System- Gehen Sie wie im Test beschrieben vor. Chromatographieren Sie das Standardpräparat und zeichnen Sie die Penicillamindisulfid-Peakreaktionen gemäß den Anweisungen für das Verfahren auf: Die relative Standardabweichung für Wiederholungsinjektionen beträgt nicht mehr als 2,0 %.
Vorgehensweise- [Hinweis-Verwenden Sie Peakbereiche, in denen Peakreaktionen angegeben sind.] Injizieren Sie getrennt gleiche Volumina (ca. 20 µL) der Standardzubereitung und der Testzubereitung in den Chromatographen, zeichnen Sie die Chromatogramme auf und messen Sie die Reaktionen für die Penicillamindisulfid-Peaks. Berechnen Sie den Prozentsatz an Penicillamin-Disulfid (C10H20N2O4S2) im Penicillamin anhand der Formel:
100(CS / CU)(rU / rS)
Dabei ist CS die Konzentration von USP-Penicillamin-Disulfid RS in der Standardzubereitung in mg pro ml, CU die Konzentration von Penicillamin in der Testzubereitung in mg pro ml und rU und rS die Penicillamin-Disulfid-Peak-Reaktionen, die aus der Testzubereitung bzw. der Standardzubereitung erhalten wurden: Es werden nicht mehr als 1,0 % Penicillamin-Disulfid gefunden.
Test-
Verdünnungsmittel- Lösen Sie 1,0 g Dinatriumedetat in Wasser auf, um 1000 ml Lösung herzustellen.
Mobile Phase- Lösen Sie 6,9 ​​g einbasiges Natriumphosphat und 0,20 g Natrium-1-hexansulfonat in Wasser, um 1000 ml Lösung herzustellen. Stellen Sie mit Phosphorsäure einen pH-Wert von 3,0 ± 0,1 ein und filtrieren Sie durch einen geeigneten Filter mit einer Porosität von 1 µm oder feiner. Nehmen Sie bei Bedarf Anpassungen vor (siehe Systemeignung unter Chromatographie<621>).
Auflösungslösung- Bereiten Sie eine Lösung in Verdünnungsmittel vor, die etwa 1 mg USP Penicillamin RS und 0,1 mg USP Penicillamindisulfid RS pro ml enthält.
Standardvorbereitung- Lösen Sie eine genau abgewogene Menge USP Penicillamin RS in Verdünnungsmittel auf, um eine Lösung mit einer Konzentration von etwa 1,25 mg pro ml zu erhalten.
Assay-Vorbereitung- Etwa 125 mg genau abgewogenes Penicillamin in einen 100-ml-Messkolben geben, darin auflösen, mit Verdünnungsmittel auf das Volumen verdünnen und mischen.
Chromatographisches System (siehe Chromatographie<621>)-Der Flüssigkeitschromatograph ist mit einem 210-nm-Detektor und einer 3,9 mm × 30 cm großen Säule mit Packung L1 ausgestattet. Die Durchflussrate beträgt etwa 1,6 ml pro Minute. Chromatographieren Sie die Resolution-Lösung und zeichnen Sie die Reaktionen gemäß den Anweisungen für das Verfahren auf: Die relativen Retentionszeiten betragen etwa 0,7 für Penicillamin und 1,0 für Penicillamin-Disulfid, und die Auflösung R zwischen dem Penicillamin-Peak und dem Penicillamin-Disulfid-Peak beträgt nicht weniger als 3,0. Chromatographieren Sie das Standardpräparat und zeichnen Sie die Reaktionen gemäß den Anweisungen für das Verfahren auf: Die relative Standardabweichung für Wiederholungsinjektionen beträgt nicht mehr als 1,0 %.
Vorgehensweise- [Hinweis-Verwenden Sie Spitzenbereiche, in denen Spitzenreaktionen angegeben sind. ] Injizieren Sie getrennt gleiche Volumina (ca. 20 µL) der Standardzubereitung und der Testzubereitung in den Chromatographen, zeichnen Sie die Chromatogramme auf und messen Sie die Reaktionen für die Hauptpeaks. Berechnen Sie die Menge an Penicillamin (C5H11NO2S) in mg in der eingenommenen Portion Penicillamin anhand der Formel:
100 °C (rU / rS)
Dabei ist C die Konzentration von USP Penicillamin RS in der Standardzubereitung in mg pro ml und rU und rS die Penicillamin-Spitzenreaktionen, die aus der Testzubereitung bzw. der Standardzubereitung erhalten wurden.