1. Reinheit (HPLC)
1.1 Instrumente
Hochleistungsflüssigchromatographie, UV3000-Detektor.
Elektronische Analysenwaage
1.2 Reagenzien
Acetonitril (Chromatographiequalität), TFA (Chromatographiequalität)
1.3 Chromatographische Bedingungen
1.3.1 Säule: C18-Säule, 5 μl * 250 * 4,6 mm
1.3.2 Erkennungswellenlänge: 220 nm
Flussrate: 1,0 ml/min
Injektionsvolumen: 10 μL (als Referenz)
Verdünnungsmittel: Acetonitril
Laufzeit: 20 Minuten
1.4 Vorbereitung der mobilen Phase
Mobile Phase A (0,1 % Trifluoressigsäure, Wasser): 1,0 ml TFA, verdünnt auf 1000 ml, mit Wasser genau absorbieren, mischen und entgasen.
Mobile Phase B (0,1 % Trifluoressigsäure und Acetonitril): 1,0 ml TFA genau absorbieren, mit Acetonitril auf 1000 ml verdünnen, mischen und entgasen.
1.5 Gradientenprogramm
Zeit (Min.) A % B %
0:00 90 10
10.00 10 90
15.00 10 90
15.01 90 10
20.00 90 10
1.6 Vorbereitung der Probenlösung
0,1 g Probe abwiegen, mit Acetonitril auflösen und auf 100 ml verdünnen. Zur späteren Verwendung gut schütteln, oder die gleiche Konzentration verwenden. Bereiten Sie zwei Proben parallel vor.
1.7 Probenbestimmung
Analysieren Sie die Probe gemäß dem folgenden Probenahmeverfahren:
1) Mehr als eine Injektion der Blindlösung
2) 1 Injektion der Probenlösung 1#
3) 1 Injektion der Probenlösung 2#
1.8.0 Berechnungen
1.8.1 Zur Berechnung der Reinheit der HPLC wurde die Methode der Peakflächennormalisierung verwendet.
1.8.2 Die relative mittlere Abweichung der Reinheit zweier Nadeln darf nicht mehr als 1 % betragen.
1.8.3 Wenn die Ergebnisse beider Injektionen die Akzeptanzkriterien erfüllen, wird die durchschnittliche Reinheit als Endergebnis angenommen.