Alendronat-Natrium
C4H12NNaO7P2·3H2O 325,12
Phosphonsäure, (4-Amino-1-Hydroxybutyliden)bis-, Mononatriumsalz, Trihydrat.
Natriumtrihydrogen (4-amino-1-hydroxybutyliden)diphosphonat, Trihydrat [121268-17-5].
» Alendronat-Natrium enthält nicht weniger als 98,0 Prozent und nicht mehr als 102,0 Prozent C4H12NNaO7P2, berechnet auf der Trockenbasis.
Verpackung und Lagerung- In gut verschlossenen Behältern aufbewahren. Bei Raumtemperatur lagern.
USP-Referenzstandards<11>-
USP Alendronat-Natrium RS
Identifikation-
A: Infrarotabsorption<197M>.
B: Es erfüllt die Anforderungen des Flammentests für Natrium<191>.
Trocknungsverlust<731>- Trocknen Sie es bei einem Druck von nicht mehr als 5 mm Quecksilbersäule bei 140 bis zur Gewichtskonstanz: Es verliert nicht weniger als 16,1 % und nicht mehr als 17,1 % seines Gewichts.
Schwermetalle, Methode III<231>: 0,001 %.
Chromatographische Reinheit-
Boratlösung und Verdünnungsmittel- Bereiten Sie es wie im Test beschrieben vor.
Pufferlösung- Übertragen Sie 5,88 g Natriumcitrat-Dihydrat und 2,84 g wasserfreies dibasisches Natriumphosphat in einen 2 l-Messkolben, verdünnen Sie es mit Wasser auf das Volumen und mischen Sie. Stellen Sie mit Phosphorsäure einen pH-Wert von 8 ein und lassen Sie die Lösung durch einen Filter mit einer Porosität von 0,5 µm oder feiner laufen.
9-Fluorenylmethylchlorformiat-Lösung- Bereiten Sie eine Lösung in Acetonitril vor, die etwa 4 mg 9-Fluorenylmethylchlorformiat pro ml enthält. Bereiten Sie diese Lösung unmittelbar vor der Verwendung frisch zu.
Lösung A- Bereiten Sie eine gefilterte und entgaste Mischung aus Pufferlösung und Acetonitril (17:3) vor.
Lösung B- Bereiten Sie eine gefilterte und entgaste Mischung aus Acetonitril und Pufferlösung (7:3) vor.
Mobile Phase- Verwenden Sie variable Mischungen von Lösung A und Lösung B gemäß den Anweisungen für das chromatographische System. Nehmen Sie bei Bedarf Anpassungen vor (siehe Systemeignung unter Chromatographie<621>).
Standard-Stammlösung- Bereiten Sie eine Lösung von USP Alendronat-Natrium RS in Verdünnungsmittel mit einer bekannten Konzentration von etwa 0,6 mg pro ml vor.
Standardlösung- Übertragen Sie 5,0 ml der Standard-Stammlösung in ein 50-ml-Zentrifugenröhrchen aus Polypropylen mit Schraubverschluss, das 5 ml Boratlösung enthält. 5 ml Acetonitril und 5 ml 9-Fluorenylmethylchlorformiat-Lösung hinzufügen und 45 Sekunden lang schütteln. 30 Minuten bei Raumtemperatur stehen lassen. 20 ml Methylenchlorid hinzufügen und 1 Minute lang kräftig schütteln. 5 bis 10 Minuten lang zentrifugieren und einen Teil der klaren oberen wässrigen Schicht verwenden.
Verdünnte Standardlösung- Verdünnen Sie einen Teil der Standard-Stammlösung mit Verdünnungsmittel, um eine Lösung mit einer bekannten Konzentration von etwa 0,6 µg pro ml zu erhalten. Gehen Sie unter Verwendung von 5 ml dieser Lösung wie für die Standardlösung beschrieben vor, beginnend mit „in ein 50 ml Polypropylen-Zentrifugenröhrchen mit Schraubverschluss“.
Reagenzienleerwert- Gehen Sie unter Verwendung einer 5,0-ml-Portion Verdünnungsmittel wie für die Standardlösung beschrieben vor, beginnend mit „in ein 50-ml-Zentrifugenröhrchen aus Polypropylen mit Schraubverschluss“.
Testlösung- Übertragen Sie etwa 30 mg Alendronat-Natrium, genau abgewogen, in einen 50-ml-Messkolben, lösen Sie es auf, verdünnen Sie es mit Verdünnungsmittel auf das Volumen und mischen Sie. Gehen Sie unter Verwendung eines 5,0-ml-Volumens dieser Lösung wie für die Standardlösung beschrieben vor, beginnend mit „in ein 50-ml-Zentrifugenröhrchen aus Polypropylen mit Schraubverschluss“.
Chromatographisches System (siehe Chromatographie<621>)- Der Flüssigkeitschromatograph ist mit einem 266-nm-Detektor und einer 4,1 mm × 25 cm großen Säule ausgestattet, die die Packung L21 enthält. Die Durchflussrate beträgt etwa 1,8 ml pro Minute. Die Säulentemperatur wird bei etwa 45 °C gehalten. Der Chromatograph wird wie folgt programmiert.
Zeit (Minuten) Lösung A (%) Lösung B (%) Elution
0 100 0 Gleichgewicht
0-15 100→50 0→50 linearer Gradient
15-25 50→0 50→100 linearer Gradient
25-27 0→100 100→0 linearer Gradient
27-32 100 0 isokratisch
Chromatographieren Sie die Standardlösung und die verdünnte Standardlösung und zeichnen Sie die Peak-Reaktionen gemäß den Anweisungen für das Verfahren auf: Der Tailing-Faktor für den Hauptpeak im Chromatogramm der Standardlösung beträgt nicht mehr als 2,0; und der Peak an dieser Stelle im Chromatogramm der verdünnten Standardlösung ist mit einem Signal-Rausch-Verhältnis von nicht weniger als 3 erkennbar.
Vorgehensweise- Injizieren Sie getrennt gleiche Volumina (ca. 20 µL) der Testlösung und des Reagenzienblindwerts in den Chromatographen, zeichnen Sie die Chromatogramme auf und messen Sie die Reaktionen für alle Peaks. Ignorieren Sie alle Peaks, die denen des Reagenzienblindwerts entsprechen. Berechnen Sie den Prozentsatz jeder Verunreinigung im Alendronat-Natrium-Anteil anhand der Formel:
100(ri / rs)
Dabei ist ri die Fläche jedes Verunreinigungspeaks und rs die Summe aller Verunreinigungspeaks und des Hauptpeaks: Es werden nicht mehr als 0,1 % jeder einzelnen Verunreinigung gefunden und nicht mehr als 0,5 % der Gesamtverunreinigungen.
Test-
Pufferlösung- Übertragen Sie 14,7 g Natriumcitrat-Dihydrat und 7,05 g wasserfreies dibasisches Natriumphosphat in einen 1-l-Messkolben, verdünnen Sie mit Wasser auf das Volumen, mischen Sie und stellen Sie mit Phosphorsäure einen pH-Wert von 8 ein.
Verdünnungsmittel- 29,4 g Natriumcitrat-Dihydrat in Wasser in einem 1-Liter-Messkolben auflösen, mit Wasser auf das Volumen auffüllen und mischen.
Boratlösung- 19,1 g Natriumborat in Wasser in einem 1-Liter-Messkolben auflösen, mit Wasser auf das Volumen auffüllen und mischen.
9-Fluorenylmethylchlorformiat-Lösung- Bereiten Sie eine Lösung in Acetonitril vor, die etwa 0,5 mg 9-Fluorenylmethylchlorformiat pro ml enthält. Bereiten Sie diese Lösung unmittelbar vor der Verwendung frisch zu.
Mobile Phase- Bereiten Sie eine gefilterte und entgaste Mischung aus Pufferlösung, Acetonitril und Methanol (70:25:5) vor. Nehmen Sie bei Bedarf Anpassungen vor (siehe Systemeignung unter Chromatographie<621>).
Standardstoffaufbereitung- Bereiten Sie eine Lösung von USP Alendronat-Natrium RS in Verdünnungsmittel mit einer bekannten Konzentration von etwa 0,1 mg pro ml vor. Berechnen Sie die Konzentration CS an wasserfreiem Alendronatnatrium in dieser Lösung.
Standardvorbereitung- Übertragen Sie 5,0 ml der Standard-Stammzubereitung in ein 50 ml-Zentrifugenröhrchen aus Polypropylen mit Schraubverschluss, das 5 ml Boratlösung enthält. 5 ml 9-Fluorenylmethylchlorformiat-Lösung hinzufügen und 30 Sekunden lang schütteln. 25 Minuten bei Raumtemperatur stehen lassen. 25 ml Methylenchlorid hinzufügen und 1 Minute lang kräftig schütteln. 5 bis 10 Minuten zentrifugieren. Verwenden Sie einen Teil der klaren oberen wässrigen Schicht.
Reagenzienleerwert- Gehen Sie unter Verwendung von 5,0 ml Verdünnungsmittel wie für die Standardzubereitung beschrieben vor, beginnend mit „in ein 50 ml Polypropylen-Zentrifugenröhrchen mit Schraubverschluss“.
Probenvorbereitung - Übertragen Sie etwa 25 mg Alendronat-Natrium, genau abgewogen, in einen 250-ml-Messkolben, lösen Sie es auf, verdünnen Sie es mit Verdünnungsmittel auf das Volumen und mischen Sie.
Assay-Vorbereitung- Gehen Sie unter Verwendung von 5,0 ml der Assay-Stammzubereitung wie für die Standardzubereitung beschrieben vor, beginnend mit „in ein 50 ml-Zentrifugenröhrchen aus Polypropylen mit Schraubverschluss“.
Chromatographisches System (siehe Chromatographie<621>)- Der Flüssigkeitschromatograph ist mit einem 266-nm-Detektor und einer 4,1 mm × 25 cm großen Säule ausgestattet, die die Packung L21 enthält. Die Flussrate beträgt etwa 1,2 ml pro Minute. Die Säulentemperatur wird bei etwa 35 °C gehalten. Chromatographieren Sie die Standardzubereitung und zeichnen Sie die Peak-Reaktionen gemäß den Anweisungen für das Verfahren auf: Die Säuleneffizienz beträgt nicht weniger als 1500 theoretische Böden, der Tailing-Faktor beträgt nicht mehr als 1,5 und die relative Standardabweichung für Wiederholungsinjektionen beträgt nicht mehr als 2,0 %.
Verfahren: Injizieren Sie getrennt gleiche Volumina (ca. 10 µL) der Standardzubereitung, der Testzubereitung und des Reagenzienblindwerts in den Chromatographen, zeichnen Sie die Chromatogramme auf und messen Sie die Reaktionen für die Hauptpeaks. Berechnen Sie die Menge (in mg) an C4H12NNaO7P2 in der Portion Alendronat-Natrium anhand der Formel:
DCS (rU / rS)
wobei D der Verdünnungsfaktor für die Probenvorbereitung ist; CS ist wie in der Standard-Stoffaufbereitung definiert; und rU und rS sind die Peakflächenreaktionen für Alendronsäure, die aus der Testvorbereitung bzw. der Standardvorbereitung erhalten wurden.